本发明提供一种快速定量检测心肌肌钙蛋白Ｉ、肌酸激酶同工酶与肌红蛋白的免疫荧光试剂盒，涉及生物技术领域。该试剂盒包括免疫荧光试纸条，试纸条包括支撑垫片、检测膜、偶合物垫片、过滤垫片、吸水垫片和样本垫片；样本垫片包被有红细胞阻断剂，检测膜上设有心肌肌钙蛋白Ｉ、肌酸激酶同工酶与肌红蛋白测试带和质控带，心肌肌钙蛋白Ｉ、肌酸激酶同工酶与肌红蛋白测试带分别包被有心肌肌钙蛋白Ｉ抗体A、肌酸激酶同工酶抗体A与肌红蛋白抗体A，质控带上包被有抗链霉亲和素抗体，偶合物垫片上包被有异嗜性抗体阻断剂、荧光染料偶合物。本发明免疫荧光试剂盒能够快速、准确、高灵敏度的同时检测样本中的心肌肌钙蛋白Ｉ、肌酸激酶同工酶与肌红蛋白，有助于急性心肌梗死的早期快速诊断。