本发明提供一种使用脱钙法制作骨组织切片的方法，包括如下步骤：S1：取骨组织置于由PBS配制的多聚甲醛中固定；S2：取出骨组织，冲洗后置于PBS-EDTA脱钙液中，直至骨组织初步变软；S3：切割成组织块，并放入盛有无机酸脱钙液的容器中，再置于水浴锅中脱钙；S4：将脱钙的组织块冲洗去酸后进行梯度脱水，转入盛有氯仿-无水乙醇混合液的容器内，最后再转入盛有氯仿溶液的容器内；S5：取出组织块进行浸蜡处理，包埋，切成蜡片后置于蒸馏水中，烘干，染色后封片。本发明提供的两步法脱钙，其中PBS-EDTA脱钙液有很强的结合钙离子的能力，并在温度34-38℃条件下脱钙，有效缩短预脱钙时间；采用两种酸混合脱钙，既可促进脱钙完全又能加快脱钙速度。