本发明公开了一种利用污水中大肠杆菌产海藻糖发电的酶生物燃料电池。本发明通过将全细胞透性化处理后的含有海藻糖水解酶TreA的工程大肠杆菌和葡萄糖氧化酶GOx共同固定在阳极碳毡上，将胆红素氧化酶固定在阴极碳毡上，成功制备了能够利用污水来源海藻糖产电的双室酶生物燃料电池。本发明所组装的燃料电池具有高达16.2μW/cm2的最大输出功率，在原料充足的情况下持续产电60 h后，该电池的输出电流密度依然可以保持在初始最大输出值的72％。本发明燃料电池制备方法简单且成本较低，反应在室温环境下进行，制备的酶电极催化性能好，具有良好的应用前景。