本发明公开一种促使间充质干细胞成软骨分化新的诱导体系及诱导方法。本发明对间充质干细胞的成软骨诱导体系进行优化，创新性地将KGN预处理与传统诱导因子TGF‑β3相结合，形成一种新的成软骨分化诱导体系：种子细胞体外培养过程中先经KGN预处理，再进行TGF‑β3诱导，间充质干细胞能够向软骨细胞高效分化，且所形成的软骨细胞表型稳定，无明显骨化倾向。本发明显著提高间充质干细胞成软骨分化的效率，可更好地发挥其作为软骨组织工程种子细胞的作用。