本发明涉及一种测序用DNA文库。本发明的测序用DNA文库包括第一双链DNA分子，所述第一双链DNA分子包括第一DNA链，该第一DNA链从5'端起依次包括位于5'端的桥式引物DNA序列1、目的片段特异性扩增引物DNA序列1、待读取DNA序列S、目的片段特异性扩增引物DNA序列2的反向互补序列以及位于3'端的桥式引物DNA序列2的反向互补序列，所述桥式引物DNA序列1和所述桥式引物DNA序列2是测序芯片上的DNA序列，所述目的片段特异性扩增引物DNA序列1和所述目的片段特异性扩增引物DNA序列2用于对包含待读取DNA序列S的目的DNA片段进行特异性扩增的引物DNA序列。本发明的测序用DNA文库能够增加单轮测序反应中碱基读取复杂度，从而提高测序质量。