本发明提供一种用于实时荧光定量PCR的免提取直接扩增试剂及其应用，所述直接扩增试剂包含下列组分：氢氧化钠（NaOH）、莎梵婷（Surfactin）、二甲基亚砜（DMSO）、蔗糖、chelex‑100。使用时，无需对样本进行核酸提取和纯化，只需将样本与本发明试剂按照1：1的比例等体积混合，混合液可直接用于荧光PCR检测。本发明适用于口腔拭子、鼻咽部拭子、血清、血浆、生殖道分泌物等样本中对人基因组、细菌及病毒的核酸提取；本发明不仅适用于探针法荧光PCR，也适用于染料法PCR；适用于多种临床用途，能够简单快捷的完成检测，具有成本低、操作简便、结果准确等优点。