本发明提供了转录因子SP1在调控猪RTL1基因表达中的应用。本发明以RTL1为研究对象，通过构建猪RTL1基因启动子双荧光素酶报告基因重组质粒，并找到RTL1的核心启动子区；再验证转录因子SP1与RTL1核心启动子区之间的相互作用；随后构建SP1超表达载体和合成小干扰RNA，检测SP1对RTL1的影响；还构建了转录因子SP1结合位点突变型荧光表达载体SP1-mut转染PK15细胞和C2C12细胞后检测荧光素酶活性。本发明首次证实转录因子SP1对RTL1基因转录调控的影响，为RTL1的表达调控带来了更深层次的认知，运用于家畜肉质性状的改良及肌肉发育分子调控机制的研究，具有较好的应用前景。