本发明提供了一种含WSB1基因启动子和报告基因的重组质粒及其构建方法和应用。具体地，克隆WSB1基因启动子特异性序列，重组到含萤火虫荧光素酶报告基因载体序列中，构建含WSB1基因启动子和报告基因的重组质粒，再将构建的重组质粒与海肾荧光素酶报告基因质粒pRL-TK共转染肿瘤细胞，使其稳定表达，最后通过检测双荧光素酶的活性来反映WSB1基因启动子启动转录的活性，从而应用于靶向筛选抗肿瘤药物。本发明构建的重组质粒采用的是WSB1基因启动子，并选取了特定的启动子序列，所构建的药物筛选模型具有高特异性、高灵敏度和高准确度，实现了以WSB1为靶点的抗肿瘤药物的高通量筛选。