本发明属于除草剂技术领域，尤其涉及敌草快分子印迹聚合物微球及其制备方法和应用，制备方法如下：将α-甲基丙烯酸与甲基丙烯酸甲酯的混合物、敌草快按照5-10:1的摩尔比溶于溶剂中，超声，加入交联剂，充入氮气除氧，密封，0-4℃下预聚合，将预聚物转移到聚合反应器中，加入柱层层析硅胶和引发剂，充分振荡，充入氮气除氧，密封；恒温水浴振荡器反应，冷却，置于冰箱内，加入氢氟酸，搅拌，过滤，洗涤，干燥得固体沉淀物；将固体沉淀物用脱洗溶剂索氏提取，直至洗液无法检测出敌草快残留，停止洗涤，干燥至恒重。将该敌草快分子印迹聚合物微球作为SPE柱填料，能有效检测植物源性食品中敌草快农药残留情况，保障食用农产品质量安全。