本发明提供一种检测和判定幽门螺旋杆菌耐药性的试剂盒及方法，采用核苷酸序列如SEQ ID NO.1～18所示的9对引物用于检测包括23sRNA、PBP1、PORD、OORD、16s rRNA、GYRA、rdxA六种基因型的共41个位点的突变，对目前主流的六种幽门螺旋杆菌耐药基因的突变位点进行全方位解析,根据位点找出对应的基因型，从而判断对克拉霉素、阿莫西林、呋喃唑酮、四环素、左氧氟沙星、甲硝唑的耐药性，测序读长可达1000bp，准确性高达99.999％，对指导幽门螺旋杆菌患者的个性化治疗有非常重大的意义。