一种DNA末端修复与加A的方法，该方法包括：在同一反应体系中，在dNTP存在下，利用聚合酶将片段化DNA的末端补平或切平，利用多聚核苷酸激酶将5’羟基转变成5’磷酸基团且将3’磷酸基团转变成3’羟基；在过量dATP存在下，利用不具有3’‑5’外切活性的聚合酶在双链DNA 3’末端加上dATP。所述方法能够在同一个反应体系中实现DNA末端修复与加A反应，简化酶反应和纯化步骤，提高起始DNA转化成可连接接头DNA的效率，降低对起始DNA总量的要求。