本发明属于玉米黄曲霉穗腐病抗性技术领域，公开了一种玉米病害抗性的室内快速鉴定方法，包括步骤：A、制备黄曲霉菌孢子悬浮液；B、制备消毒的供试玉米品种样品；C、将黄曲霉菌孢子悬浮液分别接种在每种消毒的供试玉米样品的每个籽粒上，恒温培养，得到感染病害的玉米品种；D、使用发病级别为9级的感病品种作为对照，确定每种感染病害的玉米品种的平均病级，按照所述平均病级划分抗性，实现玉米黄曲霉穗腐病抗性的鉴定。本发明具有鉴定周期短、鉴定成本低、结果准确的特点。