本发明为RNAi干扰片段、干扰载体及其制备方法和应用。一种RNAi干扰片段，用于干扰动物Y染色体上的Zfy基因，所述RNAi干扰片段包括以下序列：AGTTCAAACTCTAGTGATT；所述的Zfy基因负责编码的蛋白作为转录因子，与精子的发生有关。本发明提供的的RNAi干扰片段，通过对公牛的生殖细胞Y精子中的zfy基因进行沉默，阻碍、损伤或者破坏Y精子的正常发育。在与母牛交配时给予了X精子更多的受精机会，在受精前有效的控制了奶牛子代的性别从而使F1代犊牛的雌性比率大大升高，且对所需精子细胞不会造成损伤或者降低其活力，而且成本低廉。