本发明涉及一种利用大肠杆菌工程菌制备10‑羟基‑2‑癸烯酸的方法，步骤如下：(1)构建重组质粒pBbB5K‑P450融合酶、重组质粒pBbB5K‑FadK、重组质粒pBbB5K–MCAD、重组质粒pBbB5K‑YdiI；(2)构建pBbB5K‑ydiI‑MCAD‑FadK‑P450融合酶组合质粒；(3)融合酶组合质粒转化大肠杆菌，经筛选，诱导培养，制得诱导细胞；(4)将诱导细胞经转化培养基培养，制得静息细胞，然后向培养基中加入癸酸，培养，制得10‑羟基‑2‑癸烯酸。本发明以癸酸为原料发酵生产10‑羟基‑2‑癸烯酸，实现以低值癸酸生产高附加值10‑羟基‑2‑癸烯酸的过程。