本发明涉及两种人绒癌多药耐药细胞株，其保藏编号为：CCTCC NO：C2018245或CCTCC NO：C2018246。本发明是选择人绒癌JAR、JEG3细胞株作为亲代细胞，从11uM逐步增加化疗药物甲氨蝶呤(MTX)至作用浓度88uM，建立JAR/MTX(CCTCC NO：C2018245)、JEG3/MTX(CCTCC NO：C2018246)耐药细胞株。JAR/MTX、JEG3/MTX能在88uM MTX中稳定生长、传代、复苏，对MTX的耐药指数各为791.50、1040.04，除对MTX耐药外，对VP‑16、5‑FU、Taxol、ACTD有交叉耐药。且耐药细胞株建株完成后撤药培养3个月及液氮冻存半年后复苏细胞复测其耐药性，两株耐药细胞株的耐药性均为原来的90％以上，耐药细胞株的耐药稳定性极好。