本发明公开了一种四霉素A高产菌株YB101及其筛选方法和发酵生产方法。本发明对化学诱变复合紫外诱变处理后的大量菌株进行筛选时，利用多孔板培养技术并结合酶标仪检测结合于一体的简便、快速、精准、高效的高通量筛选技术应用于筛选高产目标产物的活性菌株，从而得到高产TMA活性菌株。本发明因此能够大大减轻工作量，提高筛选效率，并且操作程序简单，方法稳定，重现性好。在发酵培养过程中，利用优化的发酵条件，向发酵培养液中加入甘油，其最佳添加量的体积比为8.0％，用此含有甘油的发酵培养液对白色链霉菌进行发酵培养，通过优化发酵条件，最终检测TMA在发酵液中的产量为960.0μg/mL，相比菌株YB101的产量385.0μg/mL，提高了2.5倍。