本发明提供的利用猕猴桃茎段形成层干细胞培育猕猴桃种苗的方法包括：选择直径为0.2‑0.4cm，且在解剖镜下显示具有清晰的木质部、韧皮部的未木质化猕猴桃新梢作为接种外植体，用镊子剥离接种外植体茎段的周皮及表皮，将接种外植体茎段先置于防氧化处理液中处理，再置于形成层干细胞诱导培养基中培养，再将经形成层干细胞诱导培养基培养25‑30天后的接种外植体茎段再次切短，转入形成层细胞诱导愈伤培养基中培养，对于分化成苗的愈伤，当苗长至高度为1.0cm时，切下幼苗接种至生根培养基中养基，对于无幼苗分化的愈伤，将愈伤转入幼苗分化培养基中进行继代及分化培养。本发明提供的技术方案具有外材污染率低、诱导频率高的特点。