本发明涉及一种同时检测四种人冠状病毒的四重荧光定量检测试剂盒，属于人冠状病毒检测技术领域。所述人冠状病毒具体为MERS‑CoV/HCoV‑NL63/HCoV‑OC43/HCoV‑HKUI；所述检测试剂盒具体包括：特异性引物对和探针四组，阳性质控品和阴性质控品；所述每组异性引物对和探针均包括一对特异性引物对和一条探针序列；所述阳性质控品具体为一条人工合成的靶序列；阴性质控品为去离子水或无菌水。本发明试剂盒可单管实现同时检测四种人冠状病毒，不仅检测特异性强、检测灵敏度高，而且检测时间快，避免了逐个检测所带来的耗时长、检测成本高、容易交叉污染等缺点。目前市场上未见有类似相关产品报道，本发明试剂盒在疾病检测、传染病防控、指导临床治疗等方面具有广阔应用前景。