本发明公开了一种监测miRNA表达变化报告基因影像探针及其构建方法。所述的探针包括pcDNA3.1载体、基因片段A和B以及pG5 luc载体，所述的基因片段A、B按照A‑B顺序与线性化的pcDNA3.1载体重组，所述的片段A由CopT、BD、AD和4xmiR targets序列组成，所述的片段B为CopA，所述的pG5 luc载体包含Fluc基因。本发明的报告基因分子影像探针可以实时监测活体miRNA的表达变化，为活体miRNA表达的动态变化提供了一种实时、无创的监测工具。