本发明属于分子生物学领域，具体涉及粉棒束孢Kill Protion4基因、基因和重组蛋白的制备方法、重组蛋白及应用。本发明从一株具有较强杀虫活力的粉棒束孢FTRSY‑2菌株出发，首次从粉棒束孢基因组中克隆出2条粉棒束孢Kill Protion4基因，命名为Ifkp4‑1和Ifkp4‑2，以该基因为出发点，通过分子生物学的手段构建重组载体、工程菌、重组KP4蛋白等，并通过构建Ifkp4‑1基因敲除与回复株验证该基因的功能。本发明得到的重组KP4蛋白性质稳定，产量和纯度较高，并具有广谱杀真菌效力和药理活性，还能显著增强植株的抗逆性能，有潜力开发成为生防制剂、抗菌药品、保健产品等。