本发明公开了一种提高烟草叶片茉莉酸含量的基因NtAOS1及其克隆方法与应用。所述的能提高烟草茉莉酸含量的NtAOS1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；采用核酸干扰（RNAi）技术，设计了1段干扰片段，采用gateway技术构建了植物表达载体并转化烟草，采用qPCR技术挑选NtAOS1基因转录水平显著降低转基因植株。茉莉酸含量检测表明：NtAOS1基因表达水平降低反而造成其茉莉酸含量显著高于野生型对照。本发明为NtAOS1基因及其编码蛋白应用于烟草抗逆育种与后续烟草中茉莉酸合成代谢途径的研究提供了材料基础。