本发明公开了一种评价缩水甘油及其酯体内暴露的血红蛋白加合物检测方法，包括制备血红蛋白干粉，将血红蛋白粉进行衍生及净化；设定色谱条件进行等度洗脱；设定质谱条件进行质谱定量检测；利用上述液相‑质谱联用方法，通过标准曲线法对样品进行定量分析。本发明采用了同位素稀释超高效液相色谱串联质谱法(UHPLC‑MS/MS)，对缩水甘油的血红蛋白加合物进行定量，分析时间大大缩短，同时使得Gly‑Val‑PTH空间异构体得到较好的分离，实现同步检测，这能够更加全面的对缩水甘油的内暴露量进行评估。