本发明涉及一种甾体发酵后提取新方法，其包括以下工艺步骤：发酵液升温灭活；初始膜水通量的测定，发酵液进行膜过滤收集截留液，再进行膜的清洗，洗至初始膜水通量；所得截留液继续用甲醇萃取，分层得到甾体产品甲醇萃取液，再继续浓缩至粘稠状加水分散过滤得粗品；粗品再用第一种溶剂升温打浆，降温过滤得一精，一精再用第二种溶剂溶解、脱色、重结晶即得成品。本发明设计合理，工艺简单，可操作性强，工作环境毒害性小，不仅避免了传统工艺全萃法的的乳化难分离现象，而且提供了一种新型的分离方法，避免了有毒萃取有机溶剂的使用，解决了废水处理问题。该法成本低，收率高，最终产品符合市场品质要求。