本发明公开了一种从马蔺子中分离Hopeaphenol或/和Isohopeaphenol的方法，所述方法包括以下内容：(1)将马蔺子用碱性溶液提取，并收集提取液；(2)向收集的提取液中滴加酸性溶液，调pH＝1‑3，静置、沉淀，收集沉淀物；(3)将收集的沉淀物用有机溶剂溶解后，除去溶剂，得到马蔺子碱提酸沉物；(4)将所得马蔺子碱提酸沉物溶解于有机溶剂中，收集液体部分；(5)将步骤(4)所收集的液体通过制备色谱得到组分S2；(6)将步骤(5)所得的组分S2，进行第二次半制备分离，依次得到流分产物S22和流分产物S23；所述S22特征峰的保留时间为21‑22min，所述S23特征峰的保留时间为23‑24min。