本发明公开了一种双功能激光可裂解探针及其制备方法和质谱应用。采用“一锅反应法”，以聚乙二醇酯为连接臂，通过金‑硫键自组装作用使不同识别基团和质谱报告基团与金纳米粒子连接，得到双功能激光可裂解探针。将该双功能激光可裂解探针应用于质谱检测和成像分析，借助于识别基团对糖苷、核酸、蛋白质、小分子物质等一系列物质的高特异性识别和探针的信号放大设计，能够实现对目标待测物的简单、原位、高灵敏度、定量分析，为相关的生物学过程解释，免疫分析、临床早期诊断、肿瘤标志物筛选和预后治疗等领域提供了有力工具。