本发明公开了一种检测饲料用葡萄糖氧化酶活力的方法，属于酶制剂检测技术领域，所述方法包括以下步骤：(1)对待测葡萄糖氧化酶样品进行预处理；(2)配置成葡萄糖浓度为20g/L的葡萄糖磷酸盐缓冲液；(3)用0.1mol/L的氢氧化钠溶液终止反应，用0.020-0.030mol/L的盐酸溶液滴定剩余的氢氧化钠溶液，利用反应前后消耗的盐酸毫升数计算试验样品中葡萄糖氧化酶活力。本方法通过增加预热时间、改变反应温度和反应体系中盐酸溶液浓度，采用双指标判定反应终点，显著增加了检测方法的准确度和可重复性；用所述方法检测酶活，相对标准偏差RSD小于2％(n＝10)，本发明的准确性和可重复性均超过了河北省地方标准DB13/T 1444-2011的检测方法，取得了显著的检查效果。