本发明公开了一种橘色双冠丽鱼黑色素细胞分离和培养方法，针对橘色双冠丽鱼黑色素细胞，选用了胰蛋白酶和胶原酶I共同处理，用胰蛋白酶预消化鱼体表组织，去除表皮细胞，再用胶原酶I配制的胶原酶溶液进行二次处理，结合不同滴度浓度的percoll分层，获得活力较高的色素细胞。成功传代10代，细胞仍可以维持良好的生长状态，而且可冻存和复苏。为利用体外培养的黑色素细胞研究鱼类体色形成的分子机理，为鱼类体色分子育种提供技术支持和奠定理论基础。