本发明涉及一种用于检测副溶血弧菌的PCR检测体系、试剂盒及检测方法，PCR检测体系包括用于检测tlh基因的第一引物对和第一检测探针、用于检测tdh基因的第二引物对和第二检测探针以及用于检测ureR基因的第三引物对和第三检测探针。本发明的用于检测副溶血弧菌的PCR检测体系基于tlh、tdh、ureR三个基因同时检测，可以精准地区分副溶血弧菌的具体类型。该PCR检测体系的兼容性好，特异性和灵敏度很高，检测限达到了15copies/ml。同时，该PCR检测体系可直接以细胞为模板进行检测，检测效果与以DNA为模板检测的效果相当，因此能够实现从样品到检测这样的一步法，不需要对样品进行DNA提取操作。