本公开提供了一种工程菌株，该工程菌株是保藏编号为CGMCC NO.14821的大肠杆菌。本公开还提供了一种制备工程菌的方法，该方法包括：在工程菌宿主菌的基因组中敲入乙酸激酶后进行重组质粒的转入，使得转入后的所述工程菌宿主菌能够过表达乙酸激酶并且能够表达所述重组质粒中所插入的基因；所述重组质粒包括如SEQ ID NO.1所示的质粒、如SEQ ID NO.2所示的质粒和如SEQ ID NO.7所示的质粒。本公开还提供了该方法制备得到的工程菌、上述工程菌株和工程菌的用途以及一种利用纤维素制备金合欢烯的方法。本公开通过上述技术方案，显著地提高了利用纤维素水解产物发酵生产金合欢烯的产率。