本发明公开了一种抗PD-L1单克隆抗体，通过使用PD-L1蛋白免疫小鼠，确定免疫成功后，分离出小鼠脾脏，提取总RNA，反转录为cDNA，通过PCR扩增出抗体轻、重链基因，然后构建单链抗体噬菌体库，通过筛选获得目标抗体。本发明从噬菌体抗体库筛选出的抗PD-L1单克隆抗体对PD-L1具有良好的亲和力，并能够抑制PD-L1和PD-1的结合。该抗PD-L1单克隆抗体进一步人源化后作为免疫检查点抑制剂，可用于癌症及感染性疾病的治疗。