本发明提供了一种通过基因敲除提高5‑甲基四氢叶酸含量的方法。通过CRISPR/Cas9技术对玉米ZmGFT1实施基因敲除，发现该基因敲除后玉米中5‑甲基四氢叶酸含量得到显著提高。本发明中玉米ZmGFT1的CRISPR/Cas9靶标位点的设计以及该基因的功能能够显著影响叶酸含量的发现，不仅为该基因在玉米和其他作物中CRISPR研究提供了借鉴，还为玉米和其他作物的叶酸代谢提供了理论基础，通过提高转基因植物的叶酸含量，缓解人类在叶酸营养方面的隐形饥饿问题。