本申请公开一种基于微滴式数字PCR的EB病毒检测试剂盒，所述试剂盒包括:微滴式数字PCR用反应预混液；目的片段检测混合液，包括目的片段的扩增引物和探针，目的片段的扩增引物的序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示，目的片段的探针的序列如SEQ ID No.3所示；内标及内标检测混合液，包括作为内标的外源重组质粒，以及所述内标的扩增引物和探针，内标的扩增引物的序列如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示，内标的探针的序列如SEQ ID No.6所示；阳性对照预混液；阴性对照预混液；本申请优化利用数字PCR技术针对EB病毒进行绝对定量检测的成品试剂盒，为EB病毒相关疾病诊断提供准确的诊断依据。