本发明涉及转基因抗虫玉米2HVB4外源插入片段的旁侧序列及其检测方法。发明从转Bt cry2Ah-vp基因的玉米植株中筛选到一个抗黏虫效果显著的转基因事件2HVB4；通过染色体步移的方法获得了其3’端边界序列和5’端边界序列，分别如SEQ ID NO.1中第947-1849位所示和如SEQ ID NO.2中第1-436位所示。两端的边界序列可以作为本转化事件的特异检测序列，通过两个边界序列设计引物，可以对转基因事件2HVB4特异性检测，并应用于检测试剂盒的开发。