本发明涉及生物检测领域，特别涉及一种检测农兽药及非法添加物的胶体金试纸条及其制备方法。该试纸条包括底板和底板上依次紧密连接的样品垫、胶体金结合垫、缓冲垫、反应膜、吸水垫、不干胶；所述胶体金结合垫上包被有可与所述农兽药及非法添加物结合的标记抗体；所述缓冲垫包被有缓冲溶液；所述反应膜上沿层析方向依次设有氨基酸线、检测线和质控线；所述氨基酸线包被有氨基酸溶液；所述检测线上包被有人工合成抗原，所述质控线上包被有可与所述标记抗体结合的羊抗鼠IgG二抗。本发明试纸条能够快速用于农兽药及非法添加物的检测，灵敏度高准确性好、精密度高、显色均匀，有效地解决了现有产品灵敏度低差、显色不均、准确性不够的问题。