本发明公开了一种猪源OPN单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用。该分泌猪源OPN单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其分类命名为杂交瘤细胞株Cy2，于2019年12月19日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，保藏地址为中国.武汉.武汉大学，保藏号为CCTCC NO：C2019293。所述的猪源OPN单克隆抗体由上述杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。该单克隆抗体适用于快速准确地检测猪组织、精液或猪卵母细胞中OPN蛋白的含量，因此，可将该单克隆抗体用于制备相关的检测试剂盒或胶体金试纸等，为猪源OPN的深入研究打下坚定的基础。