本发明提供了鉴定鲟鱼性别的microRNA血清标志物、引物组、试剂盒及其应用。本发明利用高通量小RNA测序技术和microRNA芯片技术，筛选出3龄施氏鲟性腺（精巢和卵巢）差异表达miRNA种类和表达量，筛选其中36条miRNA用于筛选施氏鲟性别的血清miRNA标记物，通过常规的血清RNA抽提、cDNA的获得以及实时定量PCR等技术集合，建立了鲟鱼性别鉴定的血清miRNA标记物新方法，并在低龄的施氏鲟和西杂杂交鲟中验证，本发明方法操作简单，重复性好，是鲟鱼性别高效早期鉴定技术领域的新突破，适合推广应用，从根本上解决鲟鱼养殖产业中生产成本高、效率低等严重制约产业发展的问题。