本发明涉及基于表面修饰的四氧化三铁磁性纳米探针及其制备和应用，制备方法包括以下步骤：(1)取溶解在二氯甲烷中并且表面接枝油酸的四氧化三铁纳米颗粒均匀地分散在DMF溶剂，加入EDC和Sulfo‑NHS活化四氧化三铁纳米粒子，在室温下反应，加入醋酸溶液充分重悬；(2)再将充分溶解在醋酸溶液中的壳聚糖加入重悬后的溶液中，在室温下搅拌反应；(3)透析纯化；(4)取KGN溶剂在DMSO中，加入的四氧化三铁‑壳聚糖溶液中，充分震荡，透析纯化，即得到目的产物。与现有技术相比，本发明的制备方法操作简单，所制备的磁性纳米探针填补了目前尚未有应用于诊疗一体的、且可用于软骨修复的纳米磁珠这一空白，在软骨损伤的诊断与治疗具有广阔的应用前景。