本发明提供了一种花生土传真菌室内接种方法，包括以下步骤：S1、在室内播种花生用于做接种的花生样本；S2、从自然界收集致病力强的菌核，并在实验室PDA培养基上鉴定纯化；S3、将新鲜菌丝或菌核接种到泡涨灭菌后的谷粒上；S4、待谷粒上长满菌丝后，将2~3粒带菌谷粒放置于S1中培育出的花生样本的茎基部；S5、接种后在室内进行培养，控制室内温湿度和长日照培养接种后的花生样本。本发明的接种方法能提高花生样本土传真菌接种的发病率，感病花生样本的发病率可达100%，花生病菌室内人工接种技术高效。