本发明公开了一种用于外泌体分泌、分离和收集的脉冲搅拌式生物反应器，包括细胞培养装置、外泌体分离收集装置；外泌体分离收集装置连接细胞培养装置，并能够将外泌体从细胞培养装置内的培养液中分离出来进行收集；细胞培养装置包括搅拌装置，用于向细胞培养装置中的培养液施加搅拌动力；细胞培养装置包括脉冲装置，可以向细胞培养装置以脉冲方式加入培养液。该生物反应器可以使培养液和细胞充分混合以保持足够供氧，而且搅拌装置不直接接触细胞，减小细胞所受剪切力，同时，本发明能够模拟体内细胞生长环境，刺激NK细胞或其他悬浮细胞大量分泌细胞产物。