本发明涉及一种用于阻止变形杆菌扩散生长的培养基及其制备方法和应用。每1L所述培养基的原料组成为小牛脑浸粉10‑15g、小牛心浸粉2.5‑7.5g、蛋白胨7.5‑12.5g、氯化钠2.5‑7.5g、葡萄糖1.5‑2.5g、磷酸氢二钠2‑3g、琼脂粉7.5‑12.5g、小牛血清40‑60ml、90%乙醇10‑50ml，以及余量的水。本发明所提供的培养基使变形杆菌呈现为单菌落生长，避免扩散式生长导致变形杆菌铺满整个培养皿，从而有利于分离纯化病原菌。