本发明公开一种细胞内超氧化物的检测方法，使用二甲亚砜将荧光探针溶解作为母液，使用细胞培养基配置成含有荧光探针的细胞培养液；细胞置于含胎牛血清的细胞培养基中培养；抽取卷烟样品并抽吸，收集烟气总粒相物，根据烟气总粒相物的质量加入相应体积的二甲亚砜，得到烟气总粒相物储备液；细胞培养；使用荧光显微镜观察细胞内荧光探针的荧光信号，获取细胞内超氧化物的浓度水平。本发明通过研究烟气暴露后细胞内的活性氧浓度水平，用于评估烟气暴露对细胞的氧化应激反应的影响，对烟气成分的安全性进行生物学评价，反向为安全卷烟的研发和生产提供科学参考。