本发明公开了一种精液优选培养皿及其使用方法，其包括皿底及皿盖，其特征在于：皿底开设有一开口朝上的培养槽，皿盖盖设在皿底上；培养槽从外向内设有第一优选件、第二优选件、第三优选件及收集件；第一优选件与皿底之间具有一用于加入精液及优选液的第一空槽，第二优选件的高度低于第一优选件和第三优选件，第一优选件与第三优选件之间设有一用于取样或加样的第二空槽；第一优选件设有若干组连通第一空槽与第二空槽的三联通道，三联通道具有一定倾斜度；第三优选件设有若干个连通第二空槽与收集件的单通道；本发明实现大体积上样优选，避免离心等物理损伤精子，简化人工操作，提高了精液优选的效率。