本发明涉及一种两性霉素B白蛋白纳米制剂及其制备方法和应用，其中通过加热、还原剂和表面活性剂的作用，破坏蛋白质的疏水区域和分子内二硫键，形成富有游离巯基的白蛋白分子，通过分子间二硫键网络及疏水作用形成白蛋白纳米颗粒，在形成分子间的二硫键网络的过程中，引入小分子抗菌药物两性霉素B，可形成两性霉素B白蛋白纳米制剂。与现有技术相比，本发明充分利用了两性霉素B和白蛋白之间的高度结合力，将其现有的不足转化为优势，有望在抗感染治疗中发挥巨大应用潜力，通过体外及体内实验表明，该纳米体系改变了两性霉素B的生物分布，降低了肾脏中的药物积累。