本发明公开了一种快速测定发酵液中透明质酸含量的方法，该方法将发酵液进行吸附纯化，将吸附纯化后的上清液稀释后进行酶解，使发酵液中的透明质酸彻底酶解为4,5‑不饱和双糖，然后检测酶解前后发酵液的紫外吸收值，将酶解前后发酵液紫外吸收值的差值带入4,5‑不饱和双糖浓度与紫外吸收值的标准曲线中，计算得到发酵液中透明质酸的含量。该方法操作简便，专一性高，无需对发酵液中的透明质酸进行纯化，批次检测样品数量多，可以广泛应用于透明质酸发酵领域中对透明质酸含量的检测，为透明质酸发酵工艺的优化与过程监控提供了便捷高效的工具。