本发明公开了一种用于五种石斑鱼的分子鉴别引物、试剂盒及方法。本发明首先提供了一种用于五种石斑鱼的分子鉴别引物，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1～2所示；所述五种石斑鱼为云龙杂交斑、虎龙杂交斑、红龙杂交斑、赤点石斑鱼或斜带石斑鱼中的任意一种或几种。利用该引物，采用线粒体基因组DNA条形码与限制性核酸内切酶技术相结合的方法能够快速、有效的对五种石斑鱼进行鉴别，其反应稳定、重复性好；与传统的形态学鉴定相比，该方法具有检测准确性高、客观性强的特点；与单纯的线粒体基因组DNA条形码测序鉴定方法相比，该方法具有直观性强、判断简易的特点；因此，本发明提供的引物在鉴别五种石斑鱼或制备用于鉴别五种石斑鱼的试剂盒中具有广泛的应用前景。