本发明涉及一种抗自切和高比活力胰蛋白酶突变体，具体涉及通过分子改造和筛选获得胰蛋白酶的抗自切和高比活力突变体及其编码基因与应用，属于蛋白质和基因工程技术领域。本发明提供的胰蛋白酶突变体是在SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的基础上发生至少一个以下位点的突变获得的：R107H、R107L、R115S、R115T、K133A、K133A、K147D、K157E、K208P、K210A。比原始酶相比，具有更好的抗自切性能及更高的比活力，相对于野生型胰蛋白酶，抗自切性能提高0.67-2.88倍，比酶活提高0.07-2.98倍，改善了胰蛋白酶储存和使用过程中容易自切降低活力的问题。