本发明公开了一种检测嘧草醚和其有关物质的方法，采用高效液相色谱法检测，其中，高效液相色谱条件为：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相A为乙腈，流动相B为水，进行梯度洗脱，所述梯度洗脱程序为：0min时，流动相A的比例为30％，流动相B的比例为70％；0-10min内，流动相A的比例从30％渐变为50％；10-20min内，流动相A的比例从50％渐变为70％；20-30min内，流动相A的比例从70％渐变为90％；30-40min内，流动相A的比例从90％渐变为30％；40-45min内，流动相A的比例维持30％。本发明定量准确、重复性好、各色谱峰能有效分离，可以准确控制嘧草醚质量。