本发明提供一种鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖杂交瘤细胞株，单克隆抗体及其应用，通过小鼠杂交瘤单克隆抗体筛选及RT-PCR法克隆Ig可变区基因，获得稳定分泌抗曲霉菌半乳甘露聚糖抗体的杂交瘤细胞株及其可变区序列，并用ELISA方式对抗体结合特异性进行了鉴定，为抗曲霉菌半乳甘露聚糖基因工程抗体的研发奠定了基础；该鼠源性曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆抗体与曲霉菌半乳甘露聚糖反应高效价，且结合特异性强，可用于曲霉菌半乳甘露聚糖的检测，以该抗体为原料开发的检测试剂盒具备很好的临床应用价值。