本发明涉及一种B型鸡传染性鼻炎亚单位疫苗及其制备方法和应用，具体采用B型鸡传染性鼻炎外膜蛋白HMTp210基因的Region2(B-HMTp210-R2)为免疫原制备B型鸡传染性鼻炎亚单位疫苗，并对其核苷酸序列进行了优化。本发明将优化后的核苷酸序列克隆到PET-30a表达载体中并转化BL21宿主菌，使得B-HMTp210-R2的可溶表达量显著提高2倍以上，并且稳定性显著提升。本发明据此制备得到的B型鸡传染性鼻炎亚单位疫苗具有较高的安全性和免疫效果，能够快速诱导免疫动物产生高水平的中和抗体，实现B型鸡传染性鼻炎的高效免疫保护。本发明的亚单位疫苗的制备过程简单，成本低廉，易于大规模生产。