本发明公开了腐霉利半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用，本发明中，提供两种不同结构的腐霉利半抗原，其中，式(Ⅰ)所示结构的腐霉利半抗原作为腐霉利免疫用半抗原，最大程度保留了腐霉利的特征结构，使得腐霉利半抗原的免疫原性明显增强，又具有可以与载体蛋白发生偶联的羧基；用式(Ⅰ)所示结构的腐霉利半抗原与载体蛋白偶联后得到的腐霉利免疫抗原去免疫动物，更有利于刺激动物免疫应答产生特异性更强、灵敏度更高的抗体，经检测腐霉利抗体的灵敏度可达0.025μg/L，与其他有机氯类农药的交叉反应率低，为后续建立腐霉利的各种免疫分析方法提供了基础。